TIRF 顯微鏡濾光片

在基于物鏡的 TIRF 中，激光被二向色鏡反射進入物鏡，發(fā)生全反射后會再次被二向色鏡反射，發(fā)射片不僅要阻擋入射激光的散射光，還要阻擋全反射后的激光以及高角度的散

射光。相對于共聚焦顯微鏡，TIRF 需要更高的截止深度 (OD8 -10+) 才能消除激光噪音的干擾。

為了保證形成較好的漸逝場，避免溶液本底中樣品的激發(fā)，TIRF 對二向色鏡平整度的要求要高于普通激光顯微鏡，需要控制在 0.5 waves/inch (flatness) 及以下。另外，二向色鏡的厚

度也必須在 2mm 及以上，以避免安裝固定時外界應力對平整度的影響。

ET 系列 - TIRF 單波段帶通濾光片組

單個發(fā)射片具有 OD6 - 7 的截止深度，在單色TIRF 濾光片組中，通過將一個帶通發(fā)射片和一個長通發(fā)射片組合使用，可以實現(xiàn) OD12+ 的截止深度。常規(guī)的顯微鏡cube 只能安裝最大厚度3.5 mm 的發(fā)射片和1mm 厚的二向色鏡，TIRF 濾光片組需安裝在的TIRF cube 中。

ET 系列 - TIRF 單波段長通濾光片組

ET 系列 - TIRF 多波段帶通濾光片組

對于多色 TIRF，根據(jù)顯微鏡結構的不同，會有兩種不同的濾光片組配置。如果顯微鏡配有濾光片轉輪，可將一個常規(guī)的多波段發(fā)射片 (OD6 - 7 的截止深度) 裝到顯微鏡cube 中，在濾光片轉輪中裝上相應數(shù)量的單波段帶通發(fā)射片 (OD6 - 7 的截止深度，最后一個波段可用長通發(fā)射片 )。通過轉輪切換不同的帶通發(fā)射片可收集不同波段的熒光信號。將單波段帶通發(fā)射片和多波段發(fā)射片匹配使用可在對應激光波長處提供OD12+ 的截止深度。

對于沒有濾光片轉盤的顯微鏡，通過較好的工藝將兩片相同的多波段發(fā)射片 (OD6 - 7 的截止深度 ) 封裝到一個金屬外圈中（厚度較常規(guī)濾光片要厚），從而實現(xiàn) OD8 - 10+ 的截止深度。

1. 405 nm 激光用于光激活。

Chroma TIRF 專用 cube

相比于常規(guī)激光顯微鏡，TIRF 對二向色鏡的平整度和厚度都有更高的要求。平整度需要控制在 0.5 waves/inch 及以下，二

向色鏡的厚度也必須在 2mm 及以上，以避免安裝固定時外界應力對平整度的影響。常規(guī)的顯微鏡 cube 無法安裝厚度 2mm 及

以上的二向色鏡。另外，由于材質主要為塑料，抗形變能力也較差。針對 TIRF 應用，我們推出了具有保護的 TIRF 專用

cube ，具有如下特點：

(1) 能夠安裝最大3 mm 厚度的二向色鏡；

(2) 能夠安裝最大厚度6 mm 的發(fā)射片，可以通過兩個發(fā)射片疊加的方式提高在激光譜線及其附近的OD 值；

(3) 金屬材質，抗形變能力強，對安裝的二向色鏡不會產(chǎn)生應力。

1. Chroma TIRF cube 不單獨出售，需由 我們安裝 TIRF 二向色鏡并校正其平整度；

2. TIRF 二向色鏡采用膠水固定。